Τεστ στο περιφερικό αίμα για καρκινικά κύτταρα ή καρκινικούς παράγοντες

Γράφει ο
Δρ. Σωτήρης
Νικολόπουλος PhD, MS
Moριακός Ογκολόγος

Το τεστ "μοριακός έλεγχος για ανίχνευση ελεύθερων κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων και ογκολογικών παραγόντων σε περιφερικό αίμα'' γίνεται και στην Ελλάδα.

Αποτελεί ένα σημαντικό εργαλείο για την παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας στον ογκολογικό ασθενή, αλλά και της πρόγνωσης για την έκβαση της νόσου του. Γιατί η έρευνα και η επιστήμη εξελίσσεται και στην Ελλάδα.

ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ
Πραγματοποιείται απομόνωση ολικού RNA (total RNA) από 1ml περιφερικού αίματος
με το αντιδραστήριο Trizol-BD. Aκολούθως πραγματοποιείται πέψη τυχόν μορίων DNA από την απομόνωση του RNA κατόπιν επώασης με το ένζυμο DNAse Ι (RNAse-free). Στη
συνέχεια γίνεται μετατροπή του ολικού RNA σε συμπληρωματικό DNA (cDNA) με
το ένζυμο αντίστροφη μεταγραφάση (reverse transcriptase). Εφαρμόζεται
η μέθοδος της ποσοτικής qRT-PCR σε πραγματικό χρόνο με σκοπό τον συγκριτικό προσδιορισμό της γονιδιακής έκφρασης (gene expression) των γονιδίων που κωδικοποιούν:
1) την Guanyl Cyclase C (GCC)
2) το αντιγόνο CD24
3) το αντιαποπτωτικό γονίδιο survivin
4) την κυτταρική γλυκοπρωτείνη mucin1
5) την κυττοκερατίνη 19 (CK-19),
6) την κυττοκερατίνη 20 (CK-20),
7) το καρκινοεμβρυονικό αντιγόνο (CEA) και
8) το γονίδιο αναφοράς GAPDH (glyceraldehyde phosphate dehydrogenase)
Ο προσδιορισμός πραγματοποιείται έχοντας σαν template τα συντιθεμένα cDNAs σύμφωνα
με δημοσιευμένες εργασίες και σε σύγκριση με αντίστοιχα cDNAs δείγματος υγιούς
κοντρόλ.
Οι εκκινητές DNA (οligos) που χρησιμοποιούνται για τα ελεγχόμενα mRNAs προέρχονται
από την IDTDNA (USA). Σαν controls για την αντίδραση PCR και των εκκινητών
χρησιμοποιούνται cDNAs από αντίστοιχο δείγμα αίματος υγιούς ατόμου. Σαν
αρνητικό control για την αντίδραση PCR χρησιμοποιείται cDNA από το εξεταζόμενο δείγμα χωρίς εκκινητές. Τα αποτελέσματα τέλος αξιολογούνται κατάλληλα σε συνδυασμό με τα υπόλοιπα κλινικά κι εργαστηριακά ευρήματα του ασθενούς.

ΚΕΝΤΡΟ ΜΟΡΙΑΚΩΝ ΑΝΑΛΥΣΕΩΝ ΚΑΙ ΕΡΕΥΝΩΝ ΑΕ
ΠΑΠΑΣΤΡΑΤΟΥ 79 ΑΓΡΙΝΙΟΤEL:2641054611 – FAX: 2641054115
WEB: www. molecular-view.com